Introduction
Les thérapies cellulaires représentent une approche révolutionnaire dans la médecine moderne, offrant des traitements potentiels pour diverses maladies. Néanmoins, les caractéristiques distinctives de ces thérapies posent des obstacles considérables à la production et à l'assurance de la qualité, en particulier lorsqu'il s'agit de maintenir la stérilité en raison de leur durée de vie de stockage limitée. Cet article explore la mise en œuvre du test de stérilité rapide dans la fabrication de thérapie cellulaire, en se concentrant sur les méthodes basées sur PCR pour la détection de mycoplasmes.
Historique
Les produits pharmaceutiques, quelle que soit leur classe, nécessitent des tests de conformité approfondis pendant le développement et la fabrication pour assurer leur identité, leur pureté, leur intégrité, leur concentration, leur puissance, leur stabilité et leur stérilité. Bien que les méthodes traditionnelles d'essai de stérilité soient efficaces pour les produits pharmaceutiques conventionnels, elles présentent des défis pour les thérapies cellulaires en raison de la stabilité limitée de ce dernier et de la nécessité d'une administration rapide.
La contamination par les mycoplasmes est une préoccupation dans les installations de culture cellulaire, les estimations suggérant que la contamination par les mycoplasmes dans les matières biologiques et les matières premières pourrait atteindre entre 4% et 35% (1). Les méthodes traditionnelles de détection fondées sur la culture peuvent prendre jusqu'à 28 jours, ce qui est incompatible avec les délais de production et d'administration. Cette contrainte de temps a entraîné le besoin de méthodes de test de stérilité rapide qui peuvent fournir des résultats en quelques heures plutôt qu'en quelques semaines.
Test de stérilité rapide basé sur la PCR
Une méthode de réaction en chaîne de la polymérase (PCR) bien validée permet la détection de mycoplasmes dans de faibles unités formant des colonies (UC) dans les heures suivant la réception de l'échantillon en laboratoire, ce qui en fait une technique idéale pour les tests de stérilité dans la fabrication de thérapies cellulaires (2). La PCR est facile à effectuer, sensible, spécifique, rapide, fiable, efficace et rentable.
Avantages par rapport aux méthodes traditionnelles
- Vitesse : Résultats en quelques heures au lieu de semaines.
- Sensibilité : Peut détecter aussi peu que 10 CDU par mL, répondant aux exigences réglementaires.
- Spécificité : Capable de détecter un large éventail d'espèces de mycoplasmes.
Considérations relatives à la mise en œuvre
- Sélection d'analyse : Divers kits commerciaux de détection rapide de mycoplasmes sont disponibles, utilisant des techniques telles que l'analyse de la courbe de fusion des produits PCR ou des technologies de sonde d'hybridation par fluorescence.
- Validation : Il est crucial de confirmer la spécificité et la limite de détection du test sélectionné sur les souches de mycoplasmes, comme le recommandent les pharmacopées.
- Préparation de l'échantillon : Le type et le volume de l'échantillon utilisé dans l'analyse sont essentiels. Les échantillons doivent être préparés frais dans la mesure du possible, car l'entreposage ou la congélation peuvent réduire le nombre d'organismes viables (1). Les cultures devraient avoir grandi sans antibiotiques pendant au moins trois sous-cultures ou deux semaines, selon la période la plus longue.
- Intégration dans le processus de fabrication : La mise en œuvre de tests rapides de mycoplasmes pendant l'expansion cellulaire et les étapes finales de production, pourrait permettre des décisions d'aller / no-go en temps opportun en cas de contamination.
Méthodes alternatives de détection rapide
Bien que les méthodes basées sur la PCR soient couramment utilisées, d'autres techniques de détection rapide sont en cours de développement.
- Hybridation in situ par fluorescence (FISH) (2)
- Tests de détection d'ATP par microscopie à fluorescence et luminométrie (2)
- Séquençage de nanopores à lecture longue combiné à l'apprentissage automatique (3)
Ces méthodes offrent des options supplémentaires pour les tests de stérilité rapide, chacune avec des avantages et des considérations.
Considérations réglementaires
Le cadre réglementaire pour les méthodes de test de stérilité rapide dans la fabrication de thérapies cellulaires évolue à mesure que les agences reconnaissent la nécessité d'approches de test plus rapides et plus efficaces. Cependant, cette évolution s'accompagne de défis et d'exigences spécifiques. Les principales considérations sont les suivantes (1) :
- Respect des directives de la FDA et de l'EMA sur les méthodes microbiologiques rapides (MRM).
- Validation des méthodes pour assurer l'exactitude et la fiabilité.
- Conformité aux bonnes pratiques de fabrication (BPF) actuelles.
Plusieurs kits commerciaux de détection rapide des mycoplasmes par PCR sont disponibles pour une mise en œuvre dans les laboratoires de contrôle de la qualité, largement validés sur des centaines de souches de mycoplasmes.
La méthode d'extraction de l'ADN et les étapes d'amplification des acides nucléiques doivent être vérifiées avec un nombre approprié de répétitions pour s'assurer que la limite de détection est atteinte dans au moins 95% des répétitions. Le volume et le type d'échantillon sont également des considérations critiques lors du développement de l'analyse.
Défis liés à la mise en œuvre
La mise en œuvre de tests de stérilité rapide peut présenter des obstacles tels que :
- Coûts initiaux de l'équipement et de la formation
- Validation de la méthode pour des produits de thérapie cellulaire spécifiques
- Veiller à ce que le personnel soit compétent dans l'exécution et l'interprétation des tests
- Intégration avec les flux de travail de fabrication existants
- Acceptation et conformité réglementaires
Pour surmonter ces défis, il faut une planification minutieuse, des investissements et une collaboration avec les organismes de réglementation. Le partenariat avec des experts tiers peut considérablement faciliter le processus de mise en œuvre.
La solution Neopharm
Neopharm s'engage à soutenir l'industrie de la thérapie cellulaire en offrant des services avancés de test de stérilité basés sur la PCR. Nos processus de validation rigoureux garantissent que chaque test est soigneusement testé dans la matrice thérapeutique spécifique du médicament, atteignant ainsi les limites de détection précises requises pour la conformité réglementaire.
- Essais complets : Neopharm fournit une vaste gamme de services d'analyse, y compris la chimie, la microbiologie (y compris la stérilité), le contrôle de la qualité, le soutien à la R&D, les études de stabilité de l'ICH, la validation et le transfert de méthodes, ainsi que les services d'assurance de la qualité et d'affaires réglementaires.
- Capacités de microbiologie : Un laboratoire de microbiologie dédié à la fine pointe de la technologie offre des analyses habituelles, des tests de stérilité, des tests d'endotoxines, des tests antibiotiques et des évaluations de la charge microbienne.
- Engagement envers la qualité et l'innovation : Notre équipe d'experts ayant des antécédents scientifiques et des compétences techniques variés est prête à relever des défis complexes avec précision et efficacité.
Conclusion
Les techniques de test de stérilité rapide basées sur la PCR sont cruciales pour détecter les micro-organismes contaminants qui pourraient prendre plus d'une semaine à se développer et à détecter à l'aide de méthodes traditionnelles. Cette approche est particulièrement vitale dans les thérapies cellulaires et géniques, où la stabilité du produit médicamenteux est limitée et où l'administration au patient doit avoir lieu dans les heures suivant la fabrication.
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